蛋白質分離提純的方法,要生物化學的方法(要詳細的)

時間 2023-05-17 09:05:09

1樓:銳布凡錢農

分離提純蛋白質的方法採用滲析的方法,因為蛋白質可以形成膠體,膠體的分離好提純方法應該是滲析。

2樓:匿名使用者

1、利用透過率(或是叫孔徑,忘了)3萬以下的半透膜,加壓,反滲透,濃縮含此蛋白質的溶液;

2、調節濃縮液的ph值為,攪拌後靜置,會有絮狀沉澱;

3、過濾,收集此沉澱物,用的緩衝液沖洗,就行了。

大致就是這些了。這個活沒乾過,想象出來的。

3樓:匿名使用者

1.點樣:將新制血清5 μl、質量濃度為0.

4 g/ml的_蔗糖溶液___和質量分數為的_溴酚藍___指示劑等體積混勻後,用微量加樣器吸取5 μl樣品,小心加到電泳樣品槽的膠面上。

2.電泳。3.染色:用質量分數為的__考馬斯亮藍r250 __染色液對凝膠進行染色。

4.脫色:用體積分數為7%的_醋酸溶液___對凝膠板進行浸泡漂洗數次,直至底色脫淨。

5.制乾膠板:將已_脫色___的凝膠板放在__儲存液___中浸泡3 h~4 h後,放在兩層透氣的__玻璃紙___中間自然乾燥。

蛋白質分離純化的5種方法主要有什麼?

4樓:科創

蛋白質分離純化常用方法有:

1、沉澱,2、電泳:蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。

3、透析:利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

4、層析:a.離子交換層析,利用蛋白質的兩性游離性質,在某一特定ph時,各蛋白質的電荷量及性質不同,故可以通過離子交換層析得以分離。

如陰離子交換層析,含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。

b.分子篩,又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內,滯留時間長,大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出。

5、超速離心:既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。

分離和提純蛋白質的基本原理?

5樓:星光中續制導

分離純化蛋白質的方法及原理 (一)利用分子大小。

1、透析:將待提純蛋白質放在透析袋中放在蒸餾水中進行 。原理:利用蛋白質分子不能透過半透膜的性質,使蛋白質和其他小分子物質如無機鹽、單醣、水等分開。

2、超過濾:利用壓力和離心力,強行使其他小分子和水通過半透膜,而蛋白質留在膜上。

3、凝膠過濾層析。原理:當不同分子大小的蛋白質混合物流進凝膠層析柱時,比凝膠網孔大的分子不能進入珠內網狀結構,排阻在凝膠珠以外,在凝膠珠縫隙間隙中向下移動。

而比孔小的分子不同程度地進入凝膠珠內,這樣由於不同大小分子所經歷的路徑不同而到分離。

二)利用溶解度差別。

4、等電點沉澱。原理:不同蛋白質具有不同的等電點,當蛋白質混合物調到其中一種蛋白質的等電點時,這種蛋白質大部分和全部被沉澱下來。。

5、鹽析與鹽溶 。原理:低濃度時,中性鹽可以增加蛋白質溶解度這種現象稱為鹽溶。當離子強度增加,足夠高時,例如飽和或半飽和程度,很多蛋白質可以從水中沉澱出來,這種現象稱為鹽析。

三)根據電荷不同。

6、sds-page 全稱 十二烷基硫酸鈉—聚丙烯醯胺凝膠電泳。原理:通過加熱和sds可以使蛋白質變性,多亞基的蛋白質也解離為單亞基,處理後的樣品中肽鏈是處於無二硫鍵連線的,分離的狀態。

電泳時sds-蛋白質複合物在凝膠中的遷移率不再受蛋白質原有電荷和形狀的影響,而主要取決於蛋白質分子量。所以sds-page常用來分析蛋白質的純度和大致測定蛋白質的分子量。

7、離子交換層析。原理:氨基酸分離常用陽離子交換樹脂,樹脂被處理成鈉型,將混合氨基酸上柱,氨基酸主要以陽離子形式存在,在樹脂上與鈉離子發生交換,而被掛在樹脂上。

請簡述可用於蛋白質分離純化的四種方法及其原理?

6樓:華源網路

樓主,方法很多,我就挑幾個比較有代表的吧。

1.親和層析:利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結合作用而進行分離的一種層析技術。

原理:將具有特殊結構的親和分子製成固相吸附劑放置在層析柱中,當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由於不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質分開,然後選用適當的洗脫液,改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來。

2.凝膠過濾:利用一定大小孔隙的具有網狀結構的凝膠作層析介質(如葡聚醣凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠等),根據被分離物質的分子大小、形狀不同擴散到凝膠孔隙內的速度不同,因而通過層析柱的快慢不同而分離的一種層析法。

原理:凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法,主要是根據蛋白質的大小和形狀,即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚醣(如葡聚醣或瓊脂糖)類物質,使蛋白質混合物中的物質按分子大小的不同進行分離。

也叫做分子排阻層析(molecular-exclusion chromatography).一種利用帶孔凝膠珠作基質,按照分子大小分離蛋白質或其它分子混合物的層析技術。一般是大分子先流出來,小分子後流出來。

3.聚丙烯醯胺凝膠電泳:用於分離蛋白質和寡糖核苷酸。

作用原理 聚丙烯醯胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:(1)非變性聚丙烯醯胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。

4.鹽析:增加中性鹽濃度使蛋白質、氣體、未帶電分子溶解度降低的現象。是蛋白質分離純化中經常使用的方法,最常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉和氯化鈉等。

分離和提純蛋白質的方法

7樓:世紀網路

1. 前處理。

把蛋白質從原來的組織或溶解狀態釋放出來,保持原來的天然狀態,並不丟。

失生物活性。常用的方法:勻漿器破碎、超生波破碎、纖維素酶處理以及溶菌酶等。

超聲波破碎法:當聲波達到一定頻率時,使液體產生空穴效應使細胞破碎的技術。超聲波引起的快速振動使液體區域性產生低氣壓,這個低氣壓使液體轉化為氣體。

即形成很多小氣泡。由於區域性壓力的轉換,壓力重新公升高,氣泡崩潰。崩潰的氣泡產生乙個振動波併發送到液體中,形成剪下力使細胞破碎。

2. 粗分級。

分離可用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大,3. 細分級。

樣品的進一步純化。樣品經粗分離以後,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去。進一步純化,一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。

必要時還可選擇電泳、等電聚焦等作為最後的純化步驟。

結晶是最後的一步。

蛋白質分離提純方法

8樓:幹萊資訊諮詢

1、鹽析法:

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中,溶解度會隨鹽濃度的增高而上公升,但當鹽濃度增高到一定數值時,使水活度降低,進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和,水化膜逐漸被破壞,最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法:

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二:其。

一、與鹽溶液一樣具有脫水作用;其。

二、有機溶劑的介電常數比水小,導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑:

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用,常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用:

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

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