pcr的產物可以不可以直接拿來做再進行pcr

1樓：浦恐

一般不建議這樣做。除非你做巢式pcr。

以pcr產物作為模板，首先必須保證你的pcr產物經過純化，成分單一，因此，無論怎樣，第一輪pcr產物都要進行純化，並且必須使用高保真酶以減少鹼基錯配的可能。這樣才能以第一輪pcr產物為模板進行第二輪擴增。（用於巢式pcr）.

2樓：匿名使用者

這個主要是要看你第二次的pcr的引物和你第一次的是否一樣如果一樣的話理論上可以但是效果很不好可以保證做不出來如果不一樣而且第二輪pcr的引物是在你的第一輪pcr產物內的是可以做出來的而且不同純化這個叫nested pcr

3樓：醫渣客棧

當然~~可以啦

其實，pcr的產物，和你的原先的模版是一樣的東西——複製品罷了

4樓：匿名使用者

可以，進行適當稀釋後，直接作為模板，我做過，效果挺好，我是稀釋1000-10000倍

5樓：匿名使用者

必須進行純化，第一次pcr之後，進行電泳，用小刀將目的條帶切下，做乙個叫**，這時你得到的dna才是不含有有其它雜質片段的，可以作為模板。pcr反應有許多原因會造成反應的非特異性比方說引物的濃度過高使得引物與模版的非特異性結合等，就會產生非目的性的基因片段。必須電泳清除掉非目的性片段。

6樓：

不行 dna必須經過處理才能做模板，好像是加醣基……

7樓：***

一般都要稀釋，否則模版濃度過高，會稀釋引物，有很多非特異擴增。

至於純化，要看擴增結果是否特異。如果只有一條帶，就不用純化；如果有雜帶，就需要純化。

pcr產物**後，作為再次pcr的模板，為什麼不可以？我反覆擴增幾次都失敗了… 5

8樓：匿名使用者

我想你是用高保真酶擴增的，那麼高保真沒產物一般都沒有a尾巴，但是如果想要a尾巴做ta轉殖，可以直接在pcr產物上加-a，體系是（pcr**產物，taq酶，水，datp，taq pcr buffer），直接72度延伸20min即可。

如果你仍想繼續以**產物為模板，那麼要先檢測你的條帶是否為目的基因或是否有**到產物，如果是目的基因，那麼用它做模板，濃度不需要太嚴格，你電泳檢測一下再擴增試試。

9樓：

**率地，你用**dna跑個電泳看看，特暗或啥都沒有。你先別**，直接用產物擴。

10樓：

那就說明這次的條帶是非特異性條帶唄你怎麼就確定特異性好了不是只有一條就叫特異性好

轉基因為什麼不能直接用pcr產物連線在表達載體上?

11樓：法師藥材店

當然是可以直接將目標基因pcr後直接連到表達載體上的。但實際上在操作過程中，我們都是推薦先將目標基因的pcr產物連線到轉殖載體上後再用於構建表達載體。原因是首先如果是未知序列的話，需要用轉殖載體來對這段序列進行測定，然後好確定序列中的酶切位點，為下一步表達載體的構建策略提供必要的資訊。

然後，即使是序列很確定的基因，一般也會先裝在轉殖載體上。主要是因為你沒辦法保證你的序列的重複性。如果直接用pcr產物的話，由於你的模板並不一定是完全一致的，即使有少量的mrna有鹼基錯配，很有可能就在pcr反應中這些錯誤的mrna反轉錄的cdna就被無限放大了，這樣你連上去的序列就不一定準確了。

但如果是裝入轉殖載體的序列，從轉殖載體上獲得的序列就有絕對的一致性，這樣結果才有說服性。最後一點就是，連在轉殖載體上的片段是很穩定的，你以後進行實驗的時候還能保證可以獲得完全一致的片段。但如果重新rt-pcr，這結果就有機率不同了。

當然，對於已知序列直接pcr產物連線表達載體是很少機率出錯的，這樣做實際上是為了實驗結果的嚴謹。

12樓：匿名使用者

一是測序方便，有通用引物嘛~二是提高連線效率~

13樓：匿名使用者

酷似是為了測序方便，有時候表達載體不能進行測序，或者說不方便，就需要經過一次亞轉殖。當然，如果表達載體可以用通用引物測序就可以一步到位進行連線，測序證實沒有突變就可以去表達了。