1樓：忘記玩具
原理：是來至於雙脫氧鏈終止法——現在應用最多的核酸測序技術，由sanger等1977年提出：
模板經過測序pcr反應後形成3'末端帶有螢光標記（早期用同位素標記）的相差乙個鹼基的不同長度的產物，再根據每段dna產物的電泳速度來檢測整段dna的序列。
以上——手打——希望對你有幫助
優點：一是操作易於標準化與自動化，因為它是乙個單一的酶的反應過程，不依賴於生物體；
二是通過一次測序反應就能確定樣品中某個等位基因的順序，而pcr產物轉殖後測序時，樣品順序要在測定了數個轉殖片段之後才能確定。因為只有這樣，才能區別突變是基因組本來就有的，還是由於tag聚合酶在pcr過程中錯誤摻入核苷酸引起的。
2樓：化晴子
pcr產物測序原理也是基於雙脫氧核醣核苷終止法。只不過測序用的引物就是你自己做pcr時的引物。用pcr產物直接測序缺陷是兩端靠近引物的序列容易測不准，因此想獲得pcr產物全序列測序的話還是要鏈結到載體上測序為好。
3樓：百浩生物
目前常用的方法是連到t載體上這樣可以用通用引物。如果直接測序的話（最少得純化一下，脫鹽等），可以用你自己的引物（做pcr時用的）。
4樓：
沒法直接測序吧 怎麼也得連個t載體才能測啊
pcr產物直接測序的原理
5樓：漫舒雲南濡
目前常用的方法是連到t載體上這樣可以用通用引物。如果直接測序的話（最少得純化一下，脫鹽等），可以用你自己的引物（做pcr時用的）。
6樓：公西雨晨乾葉
pcr產物測序原理也是基於雙脫氧核醣核苷終止法。只不過測序用的引物就是你自己做pcr時的引物。用pcr產物直接測序缺陷是兩端靠近引物的序列容易測不准，因此想獲得pcr產物全序列測序的話還是要鏈結到載體上測序為好。
pcr產物直接測序和轉殖後測序的區別
7樓：匿名使用者
pcr在擴增的過程中可能會出現突變的情況，測序結果中就可能會出現套峰之類的情況，而轉殖之後測序理論上每個單轉殖裡面只會出現一種pcr產物的插入片段，可以挑選不同的轉殖進行測序，直到找到自己想要的那個。
過短的pcr產物為什麼不適於直接測序？
8樓：匿名使用者
首先過短的pcr產物純化困難，一般的pcr產物純化試劑盒都要求pcr產物片段大於150bp，過短的 pcr產物純化和準確定量都非常困難。因此我們要求用於測序的pcr產物一般不低於150bp長度。其次，由於測序技術本身的限制，測序反應對環境的干擾比較敏感，模板太短的pcr測序受外界的 干擾更大，很容易造成測序失敗。
--------**三博遠志**(測序faq)
9樓：寒風斷雪
這裡有兩個問題，pcr產物測序和pcr過短的問題熟悉pcr產物測序原理就明白，前面20-30個bp測出來市資料是不準確的，測序範圍大概是800左右，超過的需要雙向測序。
過短的pcr產物，pcr測序肯定需要純化的，如果太短的話，在膠**的時候很可能影響pcr產物濃度。一般pcr送樣測序的條件a未純化pcr產物的要求，1. 片段大於200bp；2.
請提供50ul pcr擴增產物(總量1ug-2ug)；3.取3ul樣品，應該能夠清晰的分辨出目的條帶； 自帶引物，引物濃度不低於5um,並請註明。b純化後pcr產物的要求1.
pcr產物溶於蒸餾水中(請勿溶解在te溶液中)；
2.濃度大於20ng/ul，體積大於10ul，長片段需適當增加量；3.電泳檢測條帶專一； 自帶引物
**都不是很貴，一般能22-25元一次。
為什麼質粒和pcr產物需要拿去測序啊
10樓：
質粒如果需要測序，說明你們實驗室對這個質粒中插入的基因序列不清楚，需要通過測序知道其中到底是什麼基因，絕大多數情況下是做了轉殖之後需要去確認插入到目的載體中的序列是不是正確，這樣才能進行下一步的實驗。pcr產物測序一般是為了確認pcr產物序列的正確，因為pcr過程中有可能會發生突變或者其他導致序列改變的情況，只有確認之後才能進行後續實驗。
請問pcr產物直接測序和轉殖後再測序有什麼區別，用pcr產物直接測序不是更省時間嗎，省得再連到載體上了啊
11樓：那影子是我
pcr直接測序會存在或多或少的套峰，所以通常都採用雙向引物測序，通過鹼基互補原則來彌補單向沒測出來的地方。轉殖後測序就非常準確了，而且有時候pcr跑出來有雜帶的話就必須轉殖後再拿去測序了。我也涉入分子不久，希望回答能幫到你。
12樓：士誠小人也
pcr產物直接測序，引物端約有幾十個鹼基是測不出來的，如果你恰好關注這個位置，那麼或者從另一端測通（你的產物不長），或者轉殖測序
此外，很多時候由於pcr產物不專一，直接測序效果不好，而轉殖測序沒這個問題，測序效果好於pcr產物測序。不過，如果你使用普通taq酶，pcr過程中會引入錯誤，用產物直接測序會掩蓋這些錯誤，但轉殖測序時則會保留這些錯誤。
為什麼對pcr產物直接測序沒有測序訊號
13樓：匿名使用者
原因在於測序時經歷了pcr反應及測序反應（測序反應本身也是pcr反應）二次聚合酶的打滑現象.原因不明的複雜結構,測序結果就出現突然訊號減弱或消失.出現這些現象的原因由dna模板本身立體結構所造成的.
當dna鹼基中含gc含量高的時候,從某一位置開始聚合酶的聚合反應便無法進行下去.這樣的情況,建議可以嘗試換用反向引物進行測序.或者是將pcr產物做乙個ta轉殖後再測序,可以根本上解決測序訊號中斷的問題.
pcr產物的檢測方法有哪些？都有什麼原理
14樓：匿名使用者
1.瓊脂糖凝膠電泳 同時點分子量marker，根據marker條帶判斷產物分子量大小，從而大致判斷是不是你要的
2.酶切 已知你產物的序列，看上面有什麼酶切位點，用乙個酶或者兩個酶切斷，看與理論**的條帶數目和大小是否一致。一般檢測有以上兩步就行了，如果需要知道確切的需要進行3
3.測序 連線到pmd-18t 載體上，轉到大腸桿菌中。拿到公司去測序，測序結果通過gene bank比對看與哪個基因一致，這種方法最準確
4.表達 pcr產物連到真核或者原核表達載體上，適宜條件表達出來以後的蛋白做質譜分析，看與理論產物表達的蛋白是否有一致的片段
如何對PCR擴增的產物進行酶切，pcr產物沒有純化能夠直接進行雙酶切嗎
1.首先確認pcr產物，取一小部分pcr產物跑膠。2.如果產物良好，乙個特異性很強的條帶，則用過柱的方法提純 就是你平時用的從溶液中純化dna的試劑盒就可以 樓上說的跑膠後再提，早就過時了。效率很低。3，提純加入限制性內切酶緩衝液，酶。按照平時的方法反應就可以了。4.酶切後再過柱提純就可以了。博凌科...
pcr的產物可以不可以直接拿來做再進行pcr
一般不建議這樣做。除非你做巢式pcr。以pcr產物作為模板，首先必須保證你的pcr產物經過純化，成分單一，因此，無論怎樣，第一輪pcr產物都要進行純化，並且必須使用高保真酶以減少鹼基錯配的可能。這樣才能以第一輪pcr產物為模板進行第二輪擴增。用於巢式pcr 這個主要是要看你第二次的pcr的引物和你第...