1樓：匿名使用者
確定基因在生物體內的表達情況。
2樓：匿名使用者
大概的檢測基因的表達量的差異
什麼是半定量 rt- pcr
3樓：犁半梅滕馳
望採納，因此半定量pcr時需要設定對照組。
4.保證反轉錄的效率。
5.rt-pcr需要做幾個重複孔，避免加樣的誤差。
6.所用的內參是否合適。
3，有什麼問題互相交流總結我所做的rt-pcr的經驗，提高半定量rt-pcr的可靠性或重複性需要注意的幾點.
提取rna前確保樣品的正確儲存，不能有降解。
2.提高rna的過程中避免rna酶的汙染引起rna部分降解.
提取的rna需要保證無基因組dna的汙染，因為管家基因的表達量只是相對保守，但視不同的處理方式會有變化。
希望能幫到你：1
4樓：柏公尺
半定量rt-pcr一般是在沒有條件做 實時pcr 的情況下使用，用於測定體內目的基因的表達增加減少與否，即通過目的基因跑出來的電泳帶與管家基因（如β-actin）的電泳帶的相對含量比較，觀測目的基因表達增減，另外還要做乙個β-actin的內參照對照。
管家蛋白基因就是細胞內一些表達比較穩定的基因，如β-actin在各種細胞內的含量都穩定在10%左右。因此研究的目的基因的表達量與這些比較恆定含量的基因一比較，就可以觀察到目的基因是否隨著時間改變了~~~
半定量pcr之前需要做普通pcr，為什麼有些需要做一次
5樓：匿名使用者
直接螢光定量baipcr吧，螢光定量dupcr的主要
有效資料是螢光信zhi號增dao長到最大值的一半版時的時間.螢光定量pcr是全程監權控pcr擴增的變化,並且能夠同管家基因的擴增曲線進行相對定量,而將基因的表達量數值化,我們後期也計畫做biog-pcr實驗，用taqman探針法做下來的實驗資料會更為準確些
請教半定量pcr的原理及介紹
6樓：
rt-pcr將以rna為模板的cdna合成同pcr結合在一起，提供了一種分析基因表達的快速靈敏的方法。rt-pcr用於對表達資訊進行檢測或定量。另外，這項技術還可以用來檢測基因表達差異或不必構建cdna文庫轉殖cdna。
rt-pcr比其他包括northern印跡、rnase保護分析、原位雜交及s1核酸酶分析在內的rna分析技術，更靈敏，更易於操作。
rt-pcr的模板可以為總rna或poly(a)+選擇性rna。逆轉錄反應可以使用逆轉錄酶，以隨機引物、oligo(dt)或基因特異性的引物（gsp）起始。rt-pcr可以一步法或兩步法的形式進行。
在兩步法rt-pcr中，每一步都在最佳條件下進行。cdna的合成首先在逆轉錄緩衝液中進行，然後取出1/10的反應產物進行pcr。在一步法rt-pcr中，逆轉錄和pcr在同時為逆轉錄和pcr優化的條件下，在一只管中順次進行。
實驗步驟：
trizol法rna提取步驟
1、提取總rna
2、逆轉錄反應
3、pcr反應
7樓：鳳淳雅酈美
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative
reverse
transcription
andpolymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術，較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關係和良好的重複性。
步驟：1.抽提rna，2.反轉錄獲得cdna，3.以cdna為模板做pcr
注意：步驟1，rna抽提質量一定要好，注意汙染。內參的選擇，常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3，半定量rt-pcr應該再兩管中進行，既內參和目的基因各一管，這樣便於控制，做圖的時候可以放在一各泳道裡跑！指數期和平台期一定要摸清楚！
做螢光定量pcr和半定量pcr有什麼區別？半定量的pcr退火溫度和螢光定量pcr是一樣的嗎？
8樓：匿名使用者
螢光定量比半定量更加準確，半定量做不了絕對定量，一般來說螢光定量的退火溫度更高一些，但可以一樣。
9樓：匿名使用者
螢光pcr的退火溫度高一些
10樓：匿名使用者
螢光定量比半定量更加準確
半定量pcr和螢光定量pcr有什麼不同
11樓：甕仁苑婉
完全兩個不同的概念，梯度pcr是指你的pcr儀在設定的時候可以同一時間不同位置設定一專個從高到低
屬的溫度梯度，以便在不知道退火溫度的情況下選擇乙個最適宜的退火溫度。二實時螢光定量pcr是通過再pcr過程中摻入螢光染料或釋放螢光基團，從而對模板進行相對定量或絕對定量的實驗，在實時螢光定量pcr時也可以設定梯度，總的來說實時螢光定量pcr是一種實驗方法，而梯度pcr是一種實驗手段
請解釋一下如何用半定量pcr檢測基因的表達量，要詳細的過程和這麼做的原因，非常感謝
12樓：匿名使用者
我覺得你做乙個實時定量吧……半定量現在誰還用啊。你要是有螢光定量pcr，就自己做。沒有就送出去公司做，你要想學自己跟過去在公司看著他做。
半定量多半是終點定量，重複性不好，也不是很準（話說定量pcr也有不少問題，不過最起碼比半定量好）。
你如果要做半定量，首先要把rna濃度調到比較一致。內參的存在雖然可以一定程度矯正濃度的誤差，不過那也是在quantity one這類影象分析軟體裡看的，還是可能會有人為不可避免的差別。（話說半定量有好多種設計策略，什麼競爭性、非競爭性，我不知道你是不是把內參引物和目的基因引物拿到乙個管子裡p，或者是分開p）
最後表達量圖畫法很簡單，你就拿你的每乙個體的目的基因的豐度值減去自身內參基因的豐度，然後選則乙個個體作為標準，用excel畫柱狀圖就行了。
13樓：匿名使用者
樓下說的不錯,我們實驗室現就有人做定量和半定量.重要的是樣品的量和一致才行。個體不同組織~mrna提取~pcr擴增~電泳檢測~看電泳條帶的明暗，觀察基因表達情況。
這只是粗略的方法。要精確的話，還是用定量靠譜一點。
14樓：
主要有mrna提取，rt—pcr，電泳檢測，個人覺得關鍵是反應條件必須一致，這樣跑出來的內參才能差不多一樣亮，目的條帶的灰度比內參才能準確點，建議做螢光定量，半定量已經不流行了
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