分離膠和濃縮膠的區別是什麼,濃縮膠和分離膠有什麼區別

時間 2022-03-16 11:13:50

1樓:尤尤老師

1、性質不同

濃縮膠:在不連續聚丙烯 醯胺凝膠電泳中,同一介質的凝膠濃度分為 兩種,負極的加樣側一般濃度為2%〜5%。

分離膠:不連續緩衝體系聚丙烯醯胺凝膠電泳中的一部分,其組成、緩衝液ph和凝膠孔徑與濃縮凝膠不同。它具有分子篩效應的小孔徑凝膠。

2、過程不同

濃縮膠過程:由於濃縮膠濃度低、孔徑大,分離膠濃度高,孔徑小。帶電蛋白質或核酸離子在大孔徑凝膠中運動時,阻力小,運動速度快。

當接近小孔徑凝膠時,阻力較大,移動速度減慢,使樣品濃縮,形成窄帶,減少電泳過程中的帶擴散。

分離膠過程:蛋白質或核酸在電泳過程中由濃縮膠進入分離膠,由於分子篩的作用,小分子物質容易通過,阻力小,遷移速度快。大分子由於較大的電阻而滯後,因此,即使具有類似淨電荷和相等的游泳率的物質,也會根據分子量的不同而通過分子篩效應從凝膠中分離出來。

擴充套件資料;

分離膠使用注意事項;

(一)在室溫15~30℃,相對濕度60%以下,刷膠後的紙邊自然吸收反應時間縮短,一股15~30分鐘左右分離好。若室溫低於15℃(如冬季12月至3月份),濕度大於60%(夏季),刷膠後的紙邊自然吸收反應時間延長,一般30~50分鐘,才能達到最佳分離效果。

(二)若室內溫度低於15℃或相對濕度大於60%刷膠後的紙邊自然吸收反應肘間長,影響後序加工時,可採取先將刷膠後的紙樣靜置30分鐘。

用熱風吹拂(注意不要離刷膠部位太近直吹,防止吹裂)加速紙邊的快速吸收反應,也能達到自動分離效果。(不能刷膠後立即用熱風吹拂,分離膠與紙的塗層需要一定時間的接觸反應。)

(三)在使用分離膠時,務必在印刷品切邊後立即刷膠,4~8小時後刷膠,分離效果會明顯變差,隔日效果更差

(四)因塗膠量不合適或刷膠不均勻(操作生疏)造成的分離效果不好時,必須重新切去刷膠紙邊1至2公釐後,再重新刷分離膠。

(五)使用分離膠時,務必保證刷膠紙邊吸膠均勻,滿足所需的乾燥時間(若紙邊潮濕就檢查分離效果會導致脫頁或裂口)。

(六)分離膠室內儲存一般不低於半年。

2樓:清歡雪兒

ph值不同,前者主要表現為濃縮效用,後者表現為電荷效用和分子篩效用.

濃縮效應主要在濃縮膠中完成,濃縮膠的ph6.8,在這個ph條件下,緩衝液中的hcl的cl離子幾乎全部解離,gly的等電點為6.0,僅少數解離為負離子,在電場中移動速度很慢.

酸性蛋白質在此ph下解離為負離子,三類離子的遷移速率為cl一般蛋白質gly,電泳開始後,cl離子泳動快,在其後留下乙個低離子濃度區.gly在電場中移動很慢,造成移動離子的缺乏,於是快慢離子間就形成了乙個缺少離子的高壓區,在高壓區內所有的負離子都會加速移動,當移到cl離子區域時,高電壓消失,蛋白質的移動速度慢下來,當以上穩定狀態建立後,蛋白質樣品在快慢離子間被濃縮形成乙個狹小的之間層,並按蛋白質所帶負電荷量的多少依次排列成帶,濃縮樣品,從濃縮膠進入分離膠後,膠的ph公升高,gly的離解度增大,泳動率上公升,又因為它分子小,故超過所有的蛋白質分子,緊跟在cl離子後,cl離子遷移後,低離子濃度不再存在,形成了恆定的電場強度,因此,蛋白質樣品在分離膠中的分離主要取決於它的電荷性質,分子大小和形狀,分離膠的孔徑有一定大小,對不同相對質量的蛋白質來說,通過時收到的滯阻作用不同,即使靜電荷相等的顆粒,也會由於這種分子篩的效應,把不同大小的蛋白質相互分開.

濃縮膠和分離膠有什麼區別

3樓:匿名使用者

濃縮膠和分離膠的ph值不同,前者主要表現為濃縮效用,後者表現為電荷效用和分子篩效用。

濃縮效應主要在濃縮膠中完成,濃縮膠的ph6.8,在這個ph條件下,緩衝液中的hcl的cl離子幾乎全部解離,gly的等電點為6.0,僅少數解離為負離子,在電場中移動速度很慢。

酸性蛋白質在此ph下解離為負離子,三類離子的遷移速率為cl>一般蛋白質》gly,電泳開始後,cl離子泳動快,在其後留下乙個低離子濃度區。gly在電場中移動很慢,造成移動離子的缺乏,於是快慢離子間就形成了乙個缺少離子的高壓區,在高壓區內所有的負離子都會加速移動,當移到cl離子區域時,高電壓消失,蛋白質的移動速度慢下來,當以上穩定狀態建立後,蛋白質樣品在快慢離子間被濃縮形成乙個狹小的之間層,並按蛋白質所帶負電荷量的多少依次排列成帶,濃縮樣品,從濃縮膠進入分離膠後,膠的ph公升高,gly的離解度增大,泳動率上公升,又因為它分子小,故超過所有的蛋白質分子,緊跟在cl離子後,cl離子遷移後,低離子濃度不再存在,形成了恆定的電場強度,因此,蛋白質樣品在分離膠中的分離主要取決於它的電荷性質,分子大小和形狀,分離膠的孔徑有一定大小,對不同相對質量的蛋白質來說,通過時收到的滯阻作用不同,即使靜電荷相等的顆粒,也會由於這種分子篩的效應,把不同大小的蛋白質相互分開。

濃縮膠和分離膠分別發揮的作用。

4樓:

1、濃縮膠的作用:

有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至乙個狹窄的區帶,在電泳的時候可以看到樣品被壓成一條線。

2、分離膠的作用:

有分離分子的作用,為電荷效用和分子篩效用。當樣品從濃縮膠進入分離膠時,由於蛋白的分子量不一樣,其在分離膠中的泳動速度不一樣,這樣就能夠分離目的蛋白,蛋白越大,所對應的分離膠濃度應該越小,比如90k以上的蛋白一般用6%的分離膠來分離。

5樓:匿名使用者

你是說的在sds-page裡面吧,濃縮膠的濃度比較低(5%丙烯醯胺-甲叉雙丙烯醯胺),裡面的孔徑也比較大,所有的蛋白都能夠在進入分離膠之前在同一水平線上(因為在你加樣的時候蛋白是分布在加樣孔中的,不在同一水平線上,就像運動員都不在起跑線上一樣,無法比較)。

分離膠的膠濃度比較大(>10%),裡面膠孔徑也比較小,這樣施加電壓的時候小的蛋白可以穿過孔跑到下面去,而分子量大的蛋白就可能被攔住,就跑的慢。通過這種方式以分子量大小的區別來分離蛋白質。

如果你對sds-page詳細的原理有興趣或者不清楚的地方歡迎追問~

聚丙烯醯胺凝膠電泳中分離膠和濃縮膠有何不同?

6樓:

三羥甲基甲烷的含量不同分離膠的含量高5倍左右的樣子

sds-page的分離膠和濃縮膠中tris-hcl的ph不同,為什麼?什麼作用?

7樓:士誠小人也

在sds-page不連續電泳中,制膠緩衝液使用的是tris-hcl緩衝系統,濃縮膠是ph6.7,分離膠ph8.9;而電泳緩衝液使用的tris-甘氨酸緩衝系統。

在濃縮膠中,其ph環境呈弱酸性,因此甘氨酸解離很少,其在電場的作用下,泳動效率低;而cl離子卻很高,兩者之間形成導電性較低的區帶,蛋白分子就介於二者之間泳動。由於導電性與電場強度成反比,這一區帶便形成了較高的電壓剃度,壓著蛋白質分子聚集到一起,濃縮為一狹窄的區帶。當樣品進入分離膠後,由於膠中ph的增加,呈鹼性,甘氨酸大量解離,泳動速率增加,直接緊隨氯離子之後,同時由於分離膠孔徑的縮小,在電場的作用下,蛋白分子根據其固有的帶電性和分子大小進行分離。

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