1樓:一號or棟
去除紅細胞最簡便易行的方法之一是用裂解液裂解紅細胞,它既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法,主要用於經酶消化分散的組織細胞的分離純化,淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。經紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞,可進一步用於原代培養、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。
儲存條件 2-8℃儲存。
使用說明 組織細胞樣品:
1.新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,離心棄去上清液;
2.從4℃冰箱中取出els裂解液,按1:3-5的比例向細胞沉澱中加入els裂解液(1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液),輕輕吹打混勻;
離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
4.收集沉澱部分,加入hank』s液或無血清培養液離心洗2-3次;
5.如裂解不完全可重複步驟2和3;
6.重懸細胞,用於後續實驗;如提取rna,最好是於步驟4開始使用depc水配製的溶液中進行。
血細胞: 1.新鮮抗凝血,離心棄去上清液;
2.取出4℃冰箱預冷的els裂解液,按1:6-10的比例向細胞沉澱中加入els裂解液(1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液),輕輕吹打混勻;
離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
4.收集沉澱部分,加入hank』s液或無血清培養液離心洗2-3次;
5.如裂解不完全可重複步驟2和3;
6.重懸細胞,用於後續實驗;如提取rna,最好是於步驟4開始使用depc水配製的溶液進行。
2樓:清時芳後裳
裂解液中含可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的時候。
就只會造成紅細胞的變形,生物通道擴大,膨脹,裂解,或者引起紅細胞的變性。
3樓:租全食戲
濃度差!外面的濃度大。
裡面的濃度小。
導致細胞張破。
4樓:戶歌那拉昆綸
他們的細胞液的濃度不同啊!
求紅細胞裂解液配製方法
5樓:匿名使用者
現在紅細胞裂解液都是直接買現成的了,可以去北京索萊寶買。
1.裂解液:的確是ack裂解液作用更柔和些配方:
nh4cl
khco3
na2edta
溶於1000ml蒸餾水, ph , 效果一直很好。
注意:(1) 裂解液如果放在冰箱裡,一定要預熱,37度即可。裂解期間試管也可水浴,但如果是夏天室溫比較高則不必;
2) 裂解5min後立刻離心(從所有管都混勻後計時間);
3) pbs離心洗滌2次;
4) 裂解液ph值很重要,最好一次不要配多,時間長效果不好,我一般一次配100ml,避光儲存。
2.離心速度:800-1000rpm,5min3.研磨輕柔很重要。
4.培養淋巴細胞的最佳培養液是rpmi 1640,因為是原代細胞,要用10%胎牛血清。還有非常重要的一點,要想讓細胞增殖得好,必須加二巰基乙醇(beta-2me)
5.細胞密度1-2x10^6/ml
6樓:蘇格蘭白士多啤梨
紅細胞裂解液的製備:碳酸氫鉀(khco3);氯化氨(nh4cl)8.
3g;edta-na2 ,加雙蒸水至1000ml,即工作液。(該配方出自《實用流式細胞術彩色圖譜》)
紅細胞裂解液的作用原理是什麼? 拜求答案!
紅細胞裂解液,裂解人類紅細胞紅細胞的方法?
7樓:徐藉始承教
不知道你用的和我的一樣不,我上次用的華越洋生物的紅細胞裂解液,裂解步驟如下:首先要把裂解液室溫放置直到溫度回到室溫,再用去離子水把裂解液(10×)稀釋為1×工作液(1
ml裂解液加9
ml去離子水)。
1.每1ml人類血液加10
ml工作液。
2.室溫放置15分鐘。(注意:放置時間不要超過15分鐘)。
3.加入20
ml自備1×pbs,通過稀釋反應液來終止反應。
300g離心10分鐘,吸棄上清液。
5.加入10
ml自備。1×pbs重懸沉澱。
g離心10分鐘,吸棄上清液。
7.用適當的緩衝液重懸沉澱。
8.細胞計數。
紅細胞裂解液的使用說明
紅細胞裂解液,裂解人類紅細胞紅細胞的方法?
8樓:網友
你要做什麼?提取蛋白嗎?蛋白的話,用一般的蛋白裂解液就行了,要是只是要裂解細胞的話,我覺得加水進去就好了。。。
9樓:匿名使用者
不知道你用的和我的一樣不,我上次用的華越洋生物的紅細胞裂解液,裂解步驟如下:首先要把裂解液室溫放置直到溫度回到室溫,再用去離子水把裂解液(10×)稀釋為1×工作液(1 ml 裂解液加9 ml 去離子水)。1.
每1 ml人類血液加10 ml工作液。
2.室溫放置15分鐘。(注意:放置時間不要超過15分鐘)。
3.加入20 ml自備1×pbs,通過稀釋反應液來終止反應。
300 g 離心10分鐘,吸棄上清液。
5.加入10 ml自備 1×pbs重懸沉澱。
g離心10分鐘,吸棄上清液。
7.用適當的緩衝液重懸沉澱。
8.細胞計數。
細胞儲存液的特點,紅細胞儲存液的介紹
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白細胞低紅細胞低是什麼情況,白細胞低紅細胞低是什麼情況
白細胞低,紅細胞低 建議即到正規醫院血液科西醫作相應的檢查 排除骨髓疾病 骨髓 再生不良症,白血病 骨髓瘤及轉移癌浸潤 病毒感染,脾亢進,藥物中毒等病。明確 因病施治。白細胞低和紅細胞低是什麼原因 引起白細胞減少原因 藥物因素 能引起白細胞減少的藥物很多,主要有抗癌藥,氯黴素,磺胺類消炎藥止痛片,糖...
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血紅細胞偏多會怎麼樣 血液中紅細胞偏高會怎樣
生理性增高 住在高原地區的居民其紅細胞和血紅蛋 白往往高於平原地區的居民。飲水過少或出汗過多,排除水分過多可導致暫時性的血液濃縮,造成紅細胞和血紅蛋白輕度公升高。新生兒則為生理性增高。病理性公升高 1 嚴重嘔吐,腹瀉,大量出汗,大面積燒傷病人,尿崩症,甲狀腺功能亢進危象,糖尿病酸中毒等,由於血漿中水...